卵巢早衰概念
卵巢早衰是指女性在40周岁以前，除妊娠外，由某种原因导致的闭经，以血清雌激素水平下降、促性腺激素(FSH)水平升高为特征的疾病。
卵巢功能的提早衰竭，使患者过早地丧失生育能力；雌激素水平的下降，导致骨质疏松、心血管疾病风险增加，严重影响患者的身心健康和家庭稳定。
卵巢早衰临床诊断标准
女性40周岁以前出现至少4个月的闭经，卵泡期血清检测2次或以上(2次检查间隔不少于1个月)均提示血清FSH水平40U／L，常伴有雌二醇73.2pmolfLJ。
卵巢早衰发病率
据流行病学统计，女性40岁以前的发病率为1％，30岁以前的发病率为0.1％；原发性闭经中卵巢早衰占10％～28％，继发性闭经中卵巢早衰占4％～18％，且发病率呈逐年上升的趋势。
卵巢早衰的病因
卵巢早衰病因学较为复杂，目前尚未完全清楚，已知的病因主要包括：遗传学因素(如典型的Turner综合征)、免疫因素（如自身免疫性疾病相关，桥本氏甲状腺炎、系统性红斑狼疮等；）、感染因素、医源性因素(如：盆腔手术、化疗、放疗、免疫抑制剂的使用及手术治疗等)、FSH及受体缺陷等。但是，大多数并无明确病因，这使得卵巢早衰的治疗非常困难。
卵巢早衰的治疗
目前卵巢早衰的治疗措施主要包括心理治疗、中医治疗和西医治疗，其中西医治疗中常用雌孕激素替代疗法、促排卵治疗、免疫治疗及卵巢移植，这些治疗方法虽然对卵巢早衰的临床症状具有一定的缓解作用，但尚无法从根本上修复受损的卵巢功能。
激素替代治疗可以人为地通过激素类药物提高患者血清激素水平，但仍无法恢复其生育功能，甚至可能还存在增加乳腺癌等恶性肿瘤的患病风险。
现在通过干细胞移植生成有功能的卵母细胞和卵泡细胞，有望从根本上解决恢复生育能力这一难题。
人羊膜上皮细胞(hAECs)-再生医学的新工具
羊膜（amnion），也称作胎膜，位于胎盘的最内层，构成胚胎羊水腔的内壁，为半透明的薄膜，有韧性，无神经、血管、淋巴管，羊膜提供胚胎生长发育的环境。羊膜厚度仅为0.02～0.5mm。羊膜主要可分为上皮层、基底层、致密层、纤维母细胞层和海绵层五部分。其中上皮层为单层上皮细胞(amnioticepitheticalcells，AEC)，羊膜上皮面高度皱褶，整张羊膜展开可达到2m2，有2亿左右细胞。
早在年Akle等报道，人类羊膜细胞不表达人类白细胞A、B、C、DR抗原和β2-微球蛋白。因此，羊膜免疫原性极低，几乎无免疫排斥反应。这一极低的免疫原性再加上极好的生物相容性和来源充足（伴随婴儿的出生而排出）的特点，使得羊膜成为一种易得的天然高分子生物材料。
自上世纪开始，人们就发现羊膜在烧伤、溃疡等皮肤损伤治疗以及外科伤口愈合过程中是一种非常优良的外科辅助物并且广泛应用，其中，羊膜作为移植物构建人工阴道是妇科医生所熟知的。另外，利用羊膜修复膀胱、脐膨出、预防腹部及面颈部和盆腔手术后的粘连、骨及软骨的缺损修复等均取得良好的效果。
由于羊膜是由受精卵发育至第8天的囊胚内细胞团分化而来的,故其上皮细胞保留了最早的胚胎干细胞特性。年Miki等报道羊膜上皮细胞除缺乏端粒酶表达之外,胚胎干细胞主要的分子标志物它基本都能表达，表明它具有胚胎干细胞所特有的向三个胚层组织分化的潜能。进一步研究证实，羊膜上皮细胞具有向神经细胞、心肌细胞以及肝细胞分化的潜能，移植羊膜上皮细胞具有治疗帕金森氏症、心肌梗死以及肝损伤等疾病动物模型。
上述这些结果表明，人羊膜上皮细胞(huamnamnioticepitheticalcells，hHAECs)保留胚胎干细胞特性，能向三个胚层组织分化，具有较强的分化能力；具有较好的免疫耐受能力，移植时无需HLA或基因配型；能够分泌多种抗炎因子，具有很好的抗炎症功能；因缺乏端粒酶活性，在细胞体内不会增殖，也就不会致癌，因而移植是安全的；人的羊膜是伴随婴儿出生的废弃物，来源方便，只要征求产妇的同意，容易满足伦理的要求。人羊膜细胞制备的工艺简单，数量与质量容易得到控制。羊膜上皮细胞的这些特征，基本能满足干细胞移植的标准要求，故而具有临床广泛应用的美好前景。
人羊膜上皮细胞（hAECs））修复卵巢功能的实验性支持
羊膜是由受精卵发育至第8天的囊胚内细胞团分化而来，羊膜上皮细胞和生殖细胞一样来源于早期胚胎的上胚层。因此，有学者提出，羊膜上皮细胞可能具备向生殖细胞分化的能力。年以色列学者Evron等首次证实人羊膜上皮细胞经体外诱导表达VASA、DAZL、BDF9等生殖细胞的标记，他们采用SSS培养基（合成血清代用品，通常用于IVF-ET术中胚胎及生殖细胞体外培养）可将羊膜上皮细胞诱导成为直径50um大小的卵细胞样细胞。该研究证实，人羊膜上皮细胞具有向生殖细胞分化的可能性。
赖冬梅课题组多年来进行人羊膜上皮细胞研究，发现人羊膜上皮细胞能作为滋养层培养人胚胎干细胞，保持并促进人胚胎干细胞优越的多能性，从而解决人胚胎干细胞体外培养中动物源性污染的问题。课题组研究还发现人羊膜上皮细胞具有修复神经以及胰岛功能，由此建立起稳定的人羊膜上皮细胞分离、培养以及基因改造的研究平台。并基于以上研究基础，赖冬梅课题组提出设想，人羊膜上皮细胞移植可能具有治疗卵巢早衰，从而修复卵巢功能的作用。
赖冬梅课题组采用环磷酰胺与白消安联合化疗小鼠模型，造成卵巢组织中卵泡细胞耗竭，出现纤维化及空洞，再将GFP标记羊膜上皮细胞分别行小鼠尾静脉与卵巢微注射。
结果表明：
1.通过卵巢微注射移植细胞后，GFP标记的人羊膜细胞可以在小鼠卵巢内生存，参与形成卵泡样结构；
2.羊膜上皮细胞移植后，化疗损伤的小鼠卵巢出现了各级别发育卵泡，抗苗勒氏激素免疫组化表明，化疗后小鼠的卵巢功能得到改善和恢复；
3.通过尾静脉注射方法将GFP标记的羊水细胞全身性移植入化疗后的小鼠，结果证实，移植后7天即可发现人羊膜上皮细胞进入了小鼠卵巢组织，14天后化疗后小鼠的卵巢出现初级卵泡结构，移植后1月以及2月可以看到窦状卵泡形成。GFP荧光以及人线粒体抗体检测表明，人羊膜细胞进入小鼠卵巢组织并参与卵泡的形成与发育。
以上初步研究结果表明，不论是采用卵巢微注射还是尾静脉注射的方法，人羊膜上皮细胞具有促进化疗后绝育小鼠的卵泡再生的功能。
人羊膜上皮细胞（hAECs）移植修复卵巢功能的机制探讨
1.hAECs自身具有极强的旁分泌功能，可分泌多种细胞生长因子，可抑制细胞凋亡，修复受损卵巢组织细胞；
2.hAECs可定植于卵巢受损伤部位并进行分化，部分补偿或替代修复其功能；
3.通过免疫调节作用，抑制机体免疫反应，促进受损卵巢组织的自身修复；
4.hAECS可通过修复卵巢间质，防止卵巢纤维化，从而对受损卵巢起到保护作用；
5.hAECs进入损伤卵巢后可能直达损伤部位，并分化成部分血管内皮细胞，提供营养支持；
6.hAECs可能改变了一部分基因的表达，并通过基因的改变达到调控卵巢功能的作用。
综上所述，伴随胎儿出生而成为废弃物的人羊膜上皮细胞是新近发现的一种成体干细胞，已发现人羊膜上皮细胞具有修复神经损伤、心肌损伤以及肝损伤等作用，具有广泛的临床应用价值潜能；其采集方便，安全，干细胞数量多，有望成为再生医学的新的种子细胞。赖冬梅课题组新近研究表明人羊膜上皮细胞具有向生殖细胞分化的可能性，也初步证实人羊膜上皮细胞具有修复损伤卵巢的功能，对于女性不孕不育的治疗具有重要的临床意义。
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